Уважаеми химици, моля помогнете да си приготвя такъв разтвор. С него се изследват следи от кръв и с много зор се добрах до формулата му от служител на РИОКОЗ.
В РИОКОЗ го приготвят като 2гр. бензидин разтварят в 50мл. оцетна киселина / колко процентна не благоволиха да ми кажат/
Това е първата съставка.
Втората съставка е 6% водороден прекис. Двете съставки се смесват в съотношение 1:2.
От къде мога да намеря бензидин?
И какви са тестерните хартии, които РИОКОЗ използват? Кръгли дискове с радиус 10см. , приличат на филтърна хартия...
Криминалистите приготвят бензидинов разтвор по съвсем различен начин. Аз искам да го приготвя като инспекторите от РИОКОЗ. Имам съмнения, че техният начин на приготвяне е неправилен, защото дори и нови, неупотребявани медицински инструменти дават положителна реакция за кръв след по- дълго време в бензидинов разтвор- 10- 15 мин., което е абсурдно!

Благодаря предварително!

Съдържаниет е скрито
Влезте за да го видите

Редактирано от [unknown] на 02.10.09 13:05.

За бензидин питай в жълтия магазин или във Валерус: 4,4'-диаминобифенил
За оцетната киселина, ако нищо друго не е написано, се подразбира "ледена оцетна", т.е. 100%.
За дисковете - сигурно са филтърна хартийка. Обичайна лабораторна процедура за подготвяна на такива тестерни хартийки е да се напои индикаторният разтвор връху филтърна хартия, която се изсушава внимателно и нарязва на ивички.
Фалшива положителна реакция може да се получи при много от качествените методи. Важно е да се спазва правилния протокол, и разтворите да са подготвени с правилните концентрации.
Прочети това - пероксидъд трябва да се добави по време на анализа:

"Fix embryos or tissues for 5 minutes in 12% glacial acetic acid containing 0.4% benzidine (Sigma # B-3503 CARCINOGEN). Start reaction by addition of hydrogen peroxide to a final concentration of 0.3%. Incubate at RT (22 o C). Color should develop within 10-15 minutes. Alternatively, the specimens can be incubated in an acetic acid/benzidine solution already containing freshly added hydrogen peroxide. Monitor reaction for color development and photograph immediately. The blue precipitate is unstable in the presence of peroxide, and the peroxide will also gradually destroy the specimens. Peroxide can be washed out with 12% acetic acid and fixed in methanol to stablize the precipitate, but the color will turn brown and lose intensity. Our protocol is adapted from Orkin S.H., Harosi, F.L. and Leder (1975): Differentiation of erythroleukemic cells and their somatic hybrids"

Съдържаниет е скрито
Влезте за да го видите

Благодаря!
А къде е този жълт магазин?
Да, точно ледена оцетна киселина.
А дисковете защо трябва да бъдат напоени в нещо? Мисля, че ги ползват само като подложка, върху която отчитат резултата. Въобще, всякаква информация да изкопчиш от тях е изключително трудно. Дори формулата за бензидиновият разтвор не искаха да ми кажа- Откъде накъде аз съм щял да си правя сам бензидинови проби...

Сега за това, което си ми дал за прочит:

Методът е оцветяване
Фиксирай тъканта за 5 мин. в 12% кристална оцетна киселина, съдържаща 0.5% бензидин.
Активирай реакцията с добавяне на хидроген пероксид до достигане на концентрация 0.3%. Съхрани в среда с t 22 гр. С. Оцветяването трябва да се прояви за по- малко от 10- 15 мин.
Друга алтернатива е пробата да се съхранява в разтвор оцетна киселина/ бензидин, който вече съдържа новодобавен хидроген пероксид. Опиши реакцията за оцветяване и снимай незабавно. Синята утайка е нестабилна при наличието на пероксид и постепенно той ще унищожи пробата. Прекисът може да бъде измит с 12% оцетна киселина и фиксиран с метанол, за да стабилизира пробата, но цветът ще стане кафяв и ще загуби наситеност.

Така...
Те/ инспекторите от РИОКОЗ/ идват с готов разтвор, с прибавен вече хидроген пероксид в него. Значи работят по вторият метод... може би... Но и тогава пероксидът не е "новодобавен" Притесняваме това - "опиши реакцията и снимай незабавно". Понякога се забавят и точно при това забавяне започва да се появява син цвят. По този начин ли прекисът компрометира пробата- като засилва синият цвят?
За мен са много важни тези подробности. Защото, ако добавеният по- рано прекис или по- дълго престоялата проба е причина за появяването на син цвят, а не наличието на кръв, то това означава, че от напълно чисти от кръв инструменти е възможно да се добие положителна проба.

Жълтият магазин: http://www.chimspectar.dir.bg/_wm/addressbook/?df=44
Валерус: http://www.valerus-bg.com/chem-lab-contact/

Протоколът, който дадох не е за медицински прибори, а за тъкани, но предполагам, че ще работи. Сравнявайки го с твоя протокол, изглежда, че там се ползва десетократно количество. Твоят превод леко куца, затова ще си позволя да го редактирам:

"Фиксирай тъканта за 5 мин. в 12% ледена оцетна киселина, съдържаща 0.5% бензидин. Активирай реакцията с добавяне на водороден пероксид до достигане на концентрация 0.3%. Остави реакцията да протече при стайна температура (22 гр. С). Оцветяването трябва да се появи за около 10- 15 мин.
Втори вариант: Пробата може да се остави да престои в разтвор на оцетна киселина и бензидин, съдържаща пряснодобавен водороден пероксид. Рекационната смес трябва да се следи за оцветяване и да се заснеме незабавно при такова. Получената синя утайка е нестабилна в присъствието на пероксида, който постепенно ще я унищожи. Пероксидът може да се промие с 12% оцетна кисеина и пробата да се фиксира с метанол, при което цветът (на утайката) ще стане кафяв и (тя) ще загуби наситеността си."

По първия вариант, пробата се поставя за 5 мин в оцента киселина/хидразин и чак след това се добавя пероксидът а по втория вариант - той е вече наличен. Бързото снимане е необходимо, защото цветът се губи лесно.

В извадката не се казва дали ще се получи грешна реакция, ако пероксидъд е добавен прекалено рано, но това не е невъзможно, особено като се има пред вид, че бензидинът се оксилява от хемоглобина в кръвта.

За хартийката - сега ми стана ясно - тя е просто цветови индикатор - сравнява се интензитета на оцветяването с дадени стандарти.

Малко за рецептата: казва се 12% ледена киселина, което не е много коректно, но означава, че 12мл киселина са разредени до 100мл с вода. Висчки останли концентрации са доста по-ниски от това, което са ти казали на теб: 0.5% бензидин, означава само 0.5г/100мл, а 0.3% Н2О2 - 5.2мл 6% пероксид.

Накрая - защо не пробваш всеки път с нулева проба - инструмент, който никога не е бил ползван. Ако той дава положителен резултат - значи твоите инспектори не си спзават процедура.


----
бял подпис на бяло поле

Не съм от София, но ще намеря начин да си доставя реактивите.
Значи, да искам 12% киселина, така ли? Трябва точно по тяхната схема да приготвя р-ра.
И относно- "Накрая - защо не пробваш всеки път с нулева проба - инструмент, който никога не е бил ползван. Ако той дава положителен резултат - значи твоите инспектори не си спзават процедура."- това е проблема, че на нови инструменти дава положителен резултат. Ще трябва обаче да го докажа. И като първа стъпка да си направя сав разтвор, да направя проби, да ги опиша и заснема и т.н.

Трябва ти ледена оцетна - тя може да се разреди с дестилирана вода. При стайна температура ледената оцетна киселина е течност, а не кристално вещество, но замръзва при сравнително висока температура (16.5 *Ц), затова и се нарича 'ледена'.
Разреждането става на два етапа - първо към около 80мл дест. вода се добавят 12 мл киселина, след което се долива д.Н2О до 100мл. Абсолютна точност не е задължителна.
Киселината има остра, леко задушаваща миризма, а парите й дразнят лигавиците на очите и носа. Желателно е да се работи на проветливо място.

Относно самият тест - не съм сигурен за концентрациите - пробвай и така както са ти казали, и така както намерих по нета. Всеки път сравняваш: празна проба - нов инструмент, замърсен с кръв инструмент, и почистен употребяван инструмент.


Внимание:Бензидинът е известен човешки канцероген - трябва да се работи с нитрилни ръкавици, а замърсените повърхности да се промият много добре с голямо количество вода.

ПП:В големите градове обикновено има магазини за химикали - потърси по телефонния указател.


----
бял подпис на бяло поле

Благодаря!

Съдържаниет е скрито
Влезте за да го видите